蛋白質濃縮與緩沖液置換
應用場景:
從低濃度蛋白溶液(如細胞培養上清或粗提液)中去除小分子雜質(鹽離子、溶劑等),同時濃縮目標蛋白至所需濃度。
操作流程:
- ?膜包選擇:根據目標蛋白分子量選擇截留分子量(MWCO)合適的超濾膜(例如,30 kDa膜用于濃縮150 kDa的抗體)。
- ?系統組裝:組裝TFF系統(蠕動泵、膜包、壓力表、儲液罐),用純水預沖洗膜包以去除保存劑。
- ?循環濃縮:將蛋白溶液泵入系統,調節蠕動泵轉速(例如200 RPM)和背壓閥,控制跨膜壓力(TMP)在1~3 bar。
- ?緩沖液置換:在濃縮過程中持續添加新緩沖液(透析模式),置換原液中的鹽或雜質。
- ?終點判定:通過UV監測(A280吸光度)或體積減少比例(如濃縮10倍)確定終點。
優勢:
- 避免傳統透析法的長時間等待和低效問題。
- 可處理大體積樣品(如1 L→10 mL),且活性回收率>90%。
注意事項:
- 避免過度濃縮導致蛋白聚集(控制TMP不超過膜耐受極限)。
- 操作后立即用0.1 M NaOH清洗膜包,防止蛋白殘留污染。